《动脉粥样硬化》第一、Abell-Kendall改良法页
1.原理
血清加入醇溶性氢氧化钾,使胆固醇从脂蛋白中分离出来,同时使胆固醇酯加水分解成游离胆固醇,加石油醚振摇、抽提,使胆固醇移入石油醚层,分离并取一定量的石油醚层,蒸发至干,再进行Liebermann-Burchard 显色反应,620nm比色定量。该法可用于基本功训练及组织细胞胆固醇的提取定量。
2.试剂组成
代号种类浓度组 成贮存2~8℃有效时间R1乙醇优质纯R2石油醚沸点68℃,特级纯R3水醋酸分析纯R4无水醋酸胆固醇分析用,不含HCIR5浓硫酸分析纯R6KOH液33%(W/W)KOH10g+H2O20mlR7乙醇性KOH液R194ml+R66ml临用前配制R8Liebermann配制后BurchardR420体积+R51体积+R310体积1h试剂*内用完R9胆固醇标准液5.17mmol/L胆固醇标准品200mg+R1→100ml*:在三角烧瓶内,加入无水醋酸,于冰水中冷至10℃以下,再慢慢加入浓硫酸,混合,静置10min,又加冰醋酸混匀,备用。
3.操作
图15-1 血清胆固醇(Abell法)测定操作图
按图15-1操作。
4.计算
标准总胆固醇浓度=ESA/EST×5.17(mmol/L)