《动脉粥样硬化》第二、酶法(GK-GPO-POD比色法)页
血清中甘油三酯经脂肪酶水解为甘油和脂肪酸,甘油在甘油激酶(GK)及ATP存在下,生成3-磷酸甘油,尔后,在磷酸甘油氧化酶(GPO)作用氧化成磷酸二羟丙酮并生成H2O2,H2O2与底物4-氨基安替比林和ESPAS在过氧化物酶(POD)作用下,生成红色亚醌化合物(quinoneimine),比色(500nm),其颜色深浅与甘油三酯含量成正比。
(一)手工测定法
1.试剂组成
代号种类浓度贮存2~8℃R1磷酸甘油氧化酶≥3.0KU/L冷藏(A液)抗坏血酸氧化酶≥1.0KU/L甘油激酶≥0.7KU/L4-氨基安替比林80mg/LR2脂蛋白脂酶≥2.0KU/L冷藏过氧化物酶≥10KU/LESPAS300mg/LR3(参考液)甘油酸三脂200mg/dl(2.26mmol/L)冷藏*:一般采用商品试剂盒
图15-4 血清甘油三酯测定法(酶法)操作图
2.操作
按图15-4操作。
3.计算
血清TG浓度=ESA/EST×2.26(mmol/L)
(二)生化分析仪检测
全自动生化分析仪测定操作(以CL-7200型为例)。
1.试剂
A液:GK,GPO,4-AA-P、抗坏血酸氧化酶等。
B液:POD,Lipase,ESPAS等。
标准液:甘油三油酸酯 200mg/dl(2.26mmol/L)。
2.上机参数
名称参数方法终点法波长双波长(540nm 700nm)试剂A反应时间2~3min试剂B反应时间5~6min反应温度37℃样本用量4μl试剂A用量200μl试剂B用量100μl单位mmol/L3.操作过程
4.计算
以△A=A2-A1并根据同样之标准或质控物计算,自动打印结果。
5.注意事项
①试剂与样本量可根据分析仪要求按比例改变。
②试剂在有效期内2~8℃避光保存。
③样本中甘油三酯含量超过11mmol/L需用生理盐水稀释后再测。