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水仙提取物能诱导骨髓瘤细胞凋亡

为了寻找治疗多发性骨髓瘤更有效、更安全的药物,中南大学湘雅医学院日前进行的一项国家自然科学基金资助项目,以人类多发性骨髓瘤细胞系ARH-77细胞为实验材料,证实水仙提取物能抑制ARH-77细胞增殖,诱导其凋亡。

肿瘤及许多人类疾病都是细胞周期性疾病。细胞周期事件的调和主要发生在G1/S和G2/M的转换期。植物类抗肿瘤药物的筛选和有效成分的分离是当前新药研发的重要策略之一。实践证明多种植物生物碱具有良好的抗肿瘤作用。临床使用的主要有:长春新碱、长春碱、喜树碱及其衍生物、三尖杉酯碱、高三尖杉酯碱、苦参碱、氧化苦参碱等。

水仙属石蒜科植物。到目前为止,人们已在石蒜科中发现了约500种结构各异、生物学功能不同的生物碱。石蒜治疗肿瘤的报道最早出现在公元前4世纪,石蒜碱具有抗白血病活性,氧化石蒜碱对艾氏腹水癌和肝癌腹水型小鼠的寿命延长率为121%~192%,伪石蒜碱能延长Rauscher白血病脾肿大小鼠的寿命。在石蒜科植物水仙中同样富含多种具有抗肿瘤作用的生物碱。

在实验中,研究人员采用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测水仙提取物(1.25、2.5、5、10、20微克/毫升)作用ARH-77细胞3天后细胞存活率的变化;采用荧光染色法观察水仙提取物(10微克/毫升)作用3天对ARH-77细胞凋亡的影响,以流式细胞仪分析细胞周期时相变化和检测细胞凋亡率;以核仁组织区(NOR)相关嗜银蛋白(AgNOR)染色法检测细胞NOR的改变;以透射电镜观察细胞亚微结构变化。结果显示,水仙提取物能明显抑制ARH-77细胞增殖,降低细胞存活率(P<0.01),其半数抑制浓度(IC50)为4.8微克/毫升,促进肿瘤细胞凋亡(P<0.05),阻滞细胞周期于G2/M期(P<0.01),降低AgNOR的数目(P<0.01)和促进AgNOR的融合(P<0.01),引起细胞亚微结构改变。

研究人员认为,本实验结果显示,水仙提取物能显著抑制肿瘤细胞增殖,降低肿瘤细胞的存活率,阻滞细胞周期于G2/M期;细胞形态学观察表明水仙提取物能诱导肿瘤细胞凋亡的发生。这预示着水仙提取物参与了与细胞内凋亡、周期相关的信号传导通路的调控。核仁组织区相关嗜银蛋白(AgNOR)是一组与核糖体RNA(rRNA)转录有关的酸性蛋白,可能是RNA聚合酶I的亚单位或rD鄄NA转录的调节蛋白,也可能是一种酸性的磷酸化蛋白C23(核仁素)和B23蛋白。只有当rRNA基因转录活性达到一定阈值,NOR才能被银染色,否则不能被银染色。本实验发现经水仙提取物作用后的AgNOR颗粒均数明显减少,类型从弥散型向聚集型转变,这说明水仙提取物作用后,有效地抑制了细胞内rRNA基因转录活性,从而影响细胞的增殖能力。总之,水仙提取物能显著抑制肿瘤细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡,在多发性骨髓瘤治疗中具有较好的应用前景。

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